MÉTODO AZUL DE CRESIL BRILLANTE:
GENERALIDADES:
Los
reticulocitos son células jóvenes que salen de la medula ósea a la circulación
con restos de retículos compuestos de
acido ribonucleico y desaparecen a las 24 horas. Los reticulocitos carecen de
núcleo y contienen restos de RNA (ribosomas), que es un compuesto que se
precipita en presencia de ciertos colorantes llamados “vitales”, tales como el
azul de cresil brillante (ACB), o el
azul de metileno nuevo (AMN).
El número
normal de reticulocitos es de 0.2 – 2% y
este refleja la producción de eritrocitos por la medula ósea o eritropoyesis.
METODOLOGIA:
Los
estudiantes se agruparan en grupo de dos y se realizará punción venosa para la
determinación de reticulocitos.
MATERIALES Y REACTIVOS:
- Microscopio
- Laminas portaobjetos
- Azul de cresil brillante
- Aceite de inmersión
- Elementos de bioseguridad y de
identificación
- Jeringas de 5 cc- torniquete
- Laminas portaobjetos
METODO AZUL DE CRESIL BRILLANTE:
- Azul de cresil
brillante…………………… 1.0 gr
- Solución salina al 0.85%
……………….. 99 ml
- Citrato de sodio……………………………..0.4
gr
FUNDAMENTO:
Los
eritrocitos recién liberados por la medula ósea tienen restos de este RNA que
es precipitado por el azul de cresil brillante en forma de puntos y filamentos.
Formando el complejo RNA-azul de cresil conservando la vitalidad de las células
(Coloración Supravital).
PROCEDIMIENTO:
- Tomar un tubo y agregar partes
iguales de sangre bien mezclada y solución de ACB, también pueden ser dos
gotas de sangre del paciente por una gota de colorante.
- Mezclar varias veces y
fuertemente el tubo con la mezcla
de sangre-colorante (durante 10 minutos) y se deja en reposo a temperatura
ambiente por 30 minutos ó en Baño
de Maria por 15 minutos, para asegurar tiempo adecuado para colorear los reticulocitos.
- Mezclar la solución y se hacen
dos frotis en laminas portaobjetos limpias.
- Contar 500 glóbulos rojos en cada
una de las dos láminas y anotar el
número de reticulocitos.
- Promediar el número de
reticulocitos y el número de
reticulocitos se reporta como porcentaje del número total de glóbulos
rojos.
CALCULOS:
1- Número
de reticulocitos……………… 500 glóbulos
rojos
X………………………………..100 glóbulos
rojos
2- Recuento
corregido de reticulocitos:
Hto del paciente x % de reticulocitos
RCR= ---------------------------------------------------------
Hto normal ó Hb normal
3- IPR (Índice de producción de
reticulocitos): Es el recuento de reticulocitos corregidos comparado con el recuento normal de 1%
Cifra corregida
de reticulocitos del paciente
IPR = ----------------------------------------------------------------
Cifra normal
de reticulocitos
4- Valor absoluto: Diagnóstico
% de
reticulocitos x no de glóbulos rojos /mm3
VA=
------------------------------------------------------------------
100
VALORES NORMALES:
LACTANTES: 2
– 6%
NIÑOS: 0.5
– 4%
ADULTOS: 0.2 – 2.0%
Valor
Absoluto: 30.000 – 100.000 / mm3
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