SICKLEMIA.

MÉTODO METABISULFITO DE SODIO 2%:

GENERALIDADES:

La anemia drepanocitica o anemia falciforme es una enfermedad homocigota de la hemoglobina “S”, en el cual el Ácido Glutámico del aminoácido en la sexta posición sobre la cadena beta es sustituido por la Valina. La sustitución se realiza en la superficie de la molécula que conlleva al cambio de la carga y por lo tanto de movimiento electroforetico.

La HbS es libremente soluble, cuando se encuentra completamente oxigenada, al eliminarla ocurre la polimerización de la Hb anormal formando tactoides rígidos que deforman la célula  dándole la forma de hoz o media luna. Existen varios métodos para su determinación:

• Método de metabisulfito de sodio al 2%
• Método de solubilidad en tubo
• Test cualitativo de siclindex

METODOLOGIA:

Los estudiantes  obtendrán sangre venosa recogida en EDTA y realizaran la determinación de sicklemia por el método de metabisulfito de sodio.

MATERIALES Y REACTIVOS:

• Elementos de bioseguridad y de identificación
• Jeringas de 5 cc. -torniquete
• Laminas  portaobjeto y laminillas cubreobjeto
• Metabisulfito de sodio al 2%
• Vaselina o parafina

  METODO DE METABISULFITO DE SODIO AL 2%:

FUNDAMENTO:

La sangre se mezcla con metabisulfito de sodio al 2%, un agente reductor fuerte que desoxigena la hemoglobina  formando células falciformes en presencia de hemoglobina “S”.

REACTIVOS:

• Metabisulfito de sodio ….. 0.2 gr
• Agua destilada……………10 ml

MUESTRA:

Sangre venosa en EDTA

PROCEDIMIENTO:

1-    Poner  4 gotas de metabisulfito de sodio al 2% en un tubo pequeño.

2-    Añadir 2 gotas de sangre a la solución de metabisulfito de sodio al 2% y  mezclar muy bien.

3-    Cubrir la mezcla con un cubreobjeto.

4-    Extraer el remanente con una gasa o con un papel de filtro ejerciendo una suave presión sobre el cubreobjeto. Sellar alrededor de la lámina con parafina o vaselina.

5-    Examinar la preparación para buscar células falciformes inmediatamente, a los 30 minutos, a la hora y a las dos horas.

6-    El  resultado positivo se determina por la presencia de  células falciformes dentro de este tiempo, como resultado presuntivo.

7-    La lectura definitiva se realiza a las 24 horas.

Nota; Debe montarse un control positivo y un control negativo.

CAUSAS DE ERROR:

Falsos negativos:

1-Cantidad de HbS pequeña –menor de 7%

2-Deterioro del agente reductor

3-Exceso de muestra

4-Burbujas debajo del cubreobjetos

Falsos positivos

1. Desecamiento de la lámina